Selain itu, mereka dengan jelas menunjukkan bahwa ukuran daun kopi berbeda-beda menurut setiap spesies kopi. Penulis lain lebih suka mengidentifikasi tahap perkembangan daun kopi berdasarkan warna dan teksturnya. Rodrigues Salgado dkk. Â menganggap bahwa daun muda berwarna hijau muda, halus, dan baru mengembang, sedangkan daun dewasa berwarna hijau pekat dan kurang halus.
Mempertimbangkan manfaat kesehatan dari infus daun kopi dan mempertimbangkan penekanan konsumsi suplemen makanan di negara-negara maju yang didefinisikan oleh Otoritas Keamanan Pangan Eropa sebagai "sumber nutrisi terkonsentrasi, atau zat lain dengan efek nutrisi atau fisiologis yang dipasarkan dalam bentuk 'dosis'. dan dimaksudkan untuk memperbaiki kekurangan nutrisi, mempertahankan asupan nutrisi tertentu yang cukup, atau untuk mendukung fungsi fisiologis tertentu" [38], tinjauan ini akan mengumpulkan aspek biokimia dari metabolit utama daun kopi, kemungkinan kegunaan nutrisi atau fisiologisnya, dan aspek toksiknya.Â
Data akan diringkas dengan mengelompokkan aktivitas farmakologis utama yang diketahui menurut penelitian in vitro, in vivo, dan pada manusia. Tinjauan singkat tentang penelitian yang tersedia mengenai ekstrak daun kopi dan perbedaan biokimia tergantung pada spesies kopi juga akan diberikan.
Penelitian eksperimental telah dilakukan dengan mengunjungi situs web berikut: Pubmed, ScienceDirect, Google Scholar, Scopus, SciFinder. Kata kunci yang dicari adalah : I. kopi (coffea) II. kafein, III. xantin, IV. CGA, V. xanthones, VI. diterpen, VII. biosintesis, VIII. daun kopi, IX. studi in vitro, dan studi X. in vivo. Penelitian bibliografi dilakukan dalam bahasa Inggris, Perancis, dan Italia
ALKALOID DALAM DAUN KOIP
Alkaloid utama yang terdapat pada daun kopi adalah kafein (1,3,7-trimethylxanthine), theobromine (3,7-dimethylxanthine), teofilin (1,3-dimethylxanthine), dan trigonelline. 3 metabolit pertama diklasifikasikan sebagai alkaloid purin, dan di antaranya, kafein merupakan alkaloid utama pada tanaman kopi  Peran alkaloid pada tanaman belum jelas, namun tampaknya tidak digunakan sebagai sumber nitrogen untuk meningkatkan simpanan nitrogen dalam organ tanaman.
Salah satu peran utama alkaloid ini mungkin bersifat defensif. Karena "teori pertahanan kimia", produksi kafein meningkat secara signifikan jika tanaman terkena kondisi stres seperti kondisi iklim yang tidak ideal  Serangan serangga juga dapat menyebabkan peningkatan kafein di jaringan tanaman untuk mencegah beberapa infeksi lainnya. Misalnya, ketika tanaman dari genus Camellia (Theaceae) diserang oleh Xyleborus fornicatus, biosintesis kafein meningkat untuk mencegah infeksi jamur oleh Monacosporium ambrosium.
ALKALOID: PERBEDAAN ANTAR SPESIES KOPI
Hanya sedikit penelitian yang berfokus pada kandungan metabolit sekunder pada daun kopi. Monteiro dkk. Â memberikan beberapa informasi tentang perbedaan utama antar spesies kopi. Telah ditemukan bahwa ARA memiliki kandungan kafein tertinggi pada daunnya. Khususnya, kafein terdeteksi pada daun ARA dan CAN dengan konsentrasi sekitar 15mg/g dan 12mg/g masing-masing pada daun muda, dan 6mg/g dan 5mg/g masing-masing pada daun dewasa. Hasil dinyatakan dalam mg/g bahan kering, dan data didasarkan pada analisis LC-UV. Kafein belum ditemukan pada daun C. eugenioides dan C. racemosa. Penelitian ini juga bertujuan untuk menyoroti konsentrasi teobromin dan trigonelin pada daun 4 spesies kopi yang sama. Pada daun ARA, konsentrasi teobromin adalah 0,8mg/g pada daun muda dan 0,04mg/g pada daun dewasa. Dalam CAN konsentrasi teobromin berada dalam kisaran 0,1--4mg/g pada daun muda dan 0,05--0,8mg/g pada daun dewasa. Theobromine juga ditemukan pada 1 dari 2 genotipe C. racemosa yang dianalisis.
Kandungan trigonelin lebih tinggi pada daun muda dan dewasa C.eugenioides dan C. racemosa, sekitar 12mg/g dan 9mg/g pada daun C. eugenioides dan 11mg/g dan 10mg/g pada daun C. racemosa, masing-masing. Pada daun ARA dan CAN, kandungan trigonellin masing-masing sekitar 12mg/g dan 3mg/g pada daun ARA muda dan dewasa, serta 6mg/g dan 5mg/g pada daun CAN muda dan dewasa.
Studi lain yang berfokus pada ARA menunjukkan bahwa kandungan trigonellin pada daun muda dan dewasa spesies ini adalah sekitar 4--7mg/g
