Mengenal dari Dekat Enzim Amilase

Dalam metode DNS berbasis larutan, substrat dan enzim yang sesuai dicampur dalam proporsi yang tepat dan direaksikan selama 5 menit pada suhu 50C. Setelah didinginkan hingga suhu kamar, penyerapan larutan dibaca pada 540nm. Gusakov dkk.  menerapkan metode ini untuk mendeteksi pelepasan gula pereduksi dari hidrolisis substrat oleh Bacillus sp. amilase. Mereka menemukan bahwa aktivitas amilase dapat mencapai 0,75UmL1 setelah 24jam inkubasi. Demikian pula, dalam metode NS, amilase dan pati dicampur dan diinkubasi selama 5 menit pada suhu 50C. Kemudian, reagen tembaga Somogyi ditambahkan untuk menghentikan reaksi, diikuti dengan perebusan selama 40 menit dan periode pendinginan berikutnya. Reagen Nelson arsenomolibdat kemudian ditambahkan dan campuran diinkubasi pada suhu kamar selama 10 menit. Kemudian, setelah diencerkan dengan air, larutan disentrifugasi dengan kecepatan tinggi dan supernatan diukur pada 610nm.  Selain itu, beberapa metode lain tersedia untuk penyaringan amilase, namun semuanya menggunakan substrat yang sama (pati).

BAGAIMANAKAH CARANYA . MENINGKATKAN PRODUKSI AMILASE  MIKROBA.

Tujuan utama dalam peningkatan produksi amilase adalah untuk melakukan studi optimasi dasar. Hal ini dapat dilakukan baik secara eksperimental atau dengan menerapkan desain eksperimen (DOE) dengan konfirmasi lebih lanjut dengan eksperimen yang disarankan dari DOE. Beberapa metode DOE telah diusulkan dan, dengan kemajuan perangkat lunak, mampu memberikan prediksi yang lebih baik. Gopinath dkk. [8] melakukan studi optimasi dengan menggunakan desain Box-Behnken, yang melibatkan tiga variabel (waktu inkubasi, pH, dan pati sebagai substrat), untuk produksi amilase yang lebih tinggi oleh jamur A. versicolor.

Percobaan di laboratorium sangat sesuai dengan nilai yang diprediksi dari DOE, dengan koefisien korelasi sebesar 0,9798 yang menegaskan produksi yang lebih tinggi. Srivastava dkk. mengoptimalkan kondisi untuk imobilisasi amilase secara kovalen, menggunakan glutaraldehid sebagai pengikat silang pada lembaran graphene. Dalam penelitian ini, metodologi permukaan respons yang dirancang Box-Behnken digunakan, dengan efisiensi imobilisasi ditunjukkan sebesar 84%. Studi semacam ini penting ketika molekul seperti glutaraldehid digunakan, karena tersedia dua gugus aldehida di kedua ujung molekul.

 Dengan studi optimasi, kemungkinan imobilisasi sejumlah besar molekul glutaraldehid dapat diprediksi. Dalam penelitian lain, ekstraksi berbantuan enzim dan identifikasi peptida antioksidan dan penghambat -amilase dari kacang Pinto dilakukan, menggunakan desain faktorial dengan variabel berbeda (waktu ekstraksi, suhu, dan pH). Cara lain untuk meningkatkan kerja amilase adalah dengan enkapsulasi atau penjebakannya pada alginat atau butiran lainnya. Metode ini memfasilitasi pelepasan enzim secara perlahan dan konstan serta meningkatkan stabilitasnya.

APASAJA  APLIKASI AMILASE MIKROBA DALAM INDUSTI?

Amilase menguasai sekitar 25% pasar enzim dunia.  Ini digunakan dalam makanan, deterjen, obat-obatan, dan industri kertas dan tekstil. Penerapannya dalam industri makanan meliputi produksi sirup jagung, sirup maltosa, sirup glukosa, dan jus serta fermentasi alkohol dan pembuatan kue. Ini telah digunakan sebagai bahan tambahan makanan dan untuk membuat deterjen. Amilase juga memainkan peran penting dalam pembuatan bir dan minuman keras dari gula (berdasarkan pati). Dalam proses fermentasi ini, ragi digunakan untuk mencerna gula, dan alkohol diproduksi. Fermentasi cocok untuk produksi mikroba amilase dalam kondisi lembab dan pertumbuhan yang tepat. Dua jenis proses fermentasi telah diikuti: fermentasi terendam dan fermentasi keadaan padat. Yang pertama adalah yang digunakan secara tradisional dan yang terakhir dikembangkan lebih baru. Dalam pembuatan bir tradisional, jelai malt dihaluskan dan patinya dihidrolisis menjadi gula oleh amilase pada suhu yang sesuai. Dengan memvariasikan suhu dan kondisi aktivitas - atau -amilase, gula yang tidak dapat difermentasi dan yang dapat difermentasi ditentukan. Dengan perubahan ini, kandungan alkohol, rasa, dan rasa di mulut produk akhir dapat bervariasi.

Potensi aplikasi enzim dalam industri ditentukan oleh kemampuan menyaring enzim baru dan lebih baik, fermentasi dan pemurniannya dalam skala besar, dan formulasi enzim. Sebagaimana dinyatakan di atas, metode berbeda telah ditetapkan untuk produksi enzim. Dalam kasus amilase, ekstrak kasar dapat berfungsi dengan baik di sebagian besar kasus, namun untuk aplikasi industri tertentu (misalnya farmasi), pemurnian enzim diperlukan. Hal ini dapat dicapai dengan kromatografi penukar ion, kromatografi interaksi hidrofobik, filtrasi gel, imunopresipitasi, pemisahan gel polietilen glikol/Sepharose, dan sistem dua fase dan gradien berair, di mana ukuran dan muatan amilase menentukan metode yang dipilih. . Sistem pemrograman otomatis dengan metode di atas telah meningkatkan proses secara signifikan.

Dengan perkembangan tersebut, produksi mikroba amilase telah berhasil menggantikan produksinya dengan proses kimia, khususnya di industri . Produksi amilase telah ditingkatkan dengan menggunakan strain rekayasa genetika yang mengurangi polimerisasi maltosa selama aksi amilolitik Untuk perbaikan lebih lanjut dalam proses industri, metode DOE dan enkapsulasi yang disebutkan di atas dapat diterapkan.

SECARA LEBIH RINCI PEMANFAATAN LIPASE SEBAGAI BERIKUT

UNTUK OPTIMALISASI  FERMENTASI