6. Panaskan pada suhu 120 C selama 30 menit.
7. Ampas tebu hasil hidrolisis siap difermentasi.
Penggunaan asam sulfat encer dengan pemanasan merupakan cara hidrolisis yang paling murah, efisien dan sederhana. Konsentrasi asam sulfat yang digunakan sekitar 0,5-2 % dan suhu 120C hingga 200 C.
B. Tahap Fermentasi
1.Tambahkan Natrium Hidroksida (NaoH) ke dalam campuran hasil hidrolisis.
2. Ukur pH-nya hingga 5 dengan menggunakan indikator pH.
3. Tambahkan ragi tape ke dalam campuran sebanyak 5-7 %. Ragi tape mengandung mikroba seperti Saccharomyces cereviciae yang dapat mengkonversi glukosa menjadi bioetanol.
4. Masukkan ke dalam tangki fermentasi dan tutup rapat selama 3 hari.
5. Setelah 3 hari, cairan hasil fermentasi diambil dan dipisahkan dari endapan.
6. Saring kembali agar benar-benar terbebas dari kotoran.
C. Tahap Destilasi dan Dehidrasi
