Mengenal Lebih Jauh Penyakit Pepaya oleh Jamur

PpalEPIC8 adalah protease inhibitor fungsional yang menghambat aktivitas enzim papain.

Untuk menguji apakah PpalEPIC8 mengkodekan penghambat protease sistein seperti cystatin fungsional, kami mengkloning fragmen DNA yang sesuai dengan urutan matang PpalEPIC8 ke pHIS-ATS, sebuah vektor yang memungkinkan ekspresi yang disekresikan dari protein yang ditandai-Nya di Escherichia coli (Tian dan Kamoun 2017 ), untuk mengekspresikan protein fusi N-terminal-nya. 

Kami mengurutkan beberapa plasmid rekombinan dan mengidentifikasi dua versi PpalEPIC8, PpalEPIC8A dan PpalEPIC8B, yang mungkin mewakili dua alel berbeda pada lokus yang sama pada kromosom homolog atau paralog pada lokus yang berbeda. 

Ada empat polimorfisme nukleotida tunggal (SNP) di antara mereka, dengan hanya satu SNP (substitusi G ke A) pada nukleotida ke-340 dari kerangka pembacaan terbuka yang mengarah ke perubahan residu valin (V) menjadi isoleusin (I) (G Untuk memasukkan kontrol negatif untuk menguji aktivitas penghambatan papain mereka, kami menghasilkan mutan PpalEPIC8A (PpalEPIC8Am) dengan asam amino Q, V, dan G yang dilestarikan dalam loop pengikatan pertama  bermutasi menjadi alanin (A). PpalEPIC8A rekombinannya yang ditandai, PpalPIC8B, dan PpalEPIC8Am diekspresikan dan dimurnikan dengan kromatografi afinitas. 

Protein yang dimurnikan muncul sebagai pita tunggal pada gel elektroforesis gel natrium dodesil sulfat-poliakrilamida (SDS-PAGE) (Gbr. 4A), yang menunjukkan kemurniannya yang tinggi.

Mekanisme  Infeksi 

Phytophthora palmivora adalah patogen oomycete hemibiotrophic yang menginfeksi lebih dari 200 spesies tanaman di daerah tropis dan subtropis5. Contoh inang yang penting secara ekonomi adalah pepaya, kakao, nanas, durian, pohon karet, jeruk, dan kelapa sawit. Ini juga menginfeksi spesies tanaman model, seperti Nicotiana benthamiana dan Medicago truncatula. 

Serupa dengan Phytophthora spp. lainnya, infeksi tanaman oleh P. palmivora dimulai dengan zoospora motil, yang membentuk kista setelah kontak dengan permukaan tanaman, diikuti dengan pembentukan germ tube dan kemudian apresoria menembus permukaan tanaman. Selama infeksi, P. palmivora awalnya tumbuh sebagai biotrof dengan membentuk haustoria di dalam sel inang untuk mendapatkan nutrisi, dan kemudian beralih menjadi nekrotrofi pada tahap infeksi selanjutnya.

Elisitor telah terbukti memainkan peran penting dalam interaksi tanaman-patogen. Selama infeksi patogen, tanaman mampu mengenali pola molekuler terkait patogen (PAMPs) atau pola molekul terkait mikroba (MAMPs) untuk mengaktifkan respons pertahanan yang disebut kekebalan yang dipicu PAMP (PTI). PAMP atau MAMP sering berasal dari komponen yang dilestarikan yang penting untuk kelangsungan hidup patogen dan mencakup berbagai protein dan molekul lain. 

Karena kegiatan pertahanan mereka, mereka juga dikenal sebagai elicitors. Banyak elisitor berprotein yang diproduksi oleh Phytophthora spp. telah diidentifikasi dan dikarakterisasi dari kultur filtrat.

Elisitor ini adalah protein yang disekresikan dan beberapa di antaranya juga merupakan glikoprotein. Contoh yang ditandai dengan baik termasuk P. infestans elicitin INF116, P. parasitica (nama saat ini: P. nicotianae) 34kDa glikoprotein elisitor (CBEL) dua glikoprotein 32kDa dan 42kDa dari P. megasperma, sebuah oligopeptida dari 13 asam amino (Pep-13) dalam glikoprotein dinding sel (GP42) dari P. sojae, dan P. sojae glikosida keluarga hidrolase 12 (GH12) protein XEG122.