Cerita dimulai saat pihak Umbrella Corporation dibawah pimpinanJendralCain (Thomas Kretschmann) membuka kembali The Hive yang sempat ditutup akibat kontaminasi virus-T. Tanpa diduga, virus-T sudah menjangkiti semua yang ada di The Hive sehingga tidak menyisakan apapun. Akhirnya ketika The Hive dibuka, semua virus yang ada disana (bersama semuazombiedanmonsternya) langsung keluar dan menginfeksi seisi KotaRakun.
Beberapa orang penting Umbrella seperti Dr. Ashford (Jared Harris) dan anaknya Angie Ashford (Sophie Vavasseur) langsung diungsikan oleh pihak Umbrella. Ketika dalam perjalanan, mobil yang membawa Angie Ashford dari sekolah mengalami kecelakaan, dan Angie secara mengejutkan selamat. Dia pun kembali ke sekolahnya untuk bersembunyi.
- Milla Jovovich sebagai Alice
- Sienna Guillory sebagai Jill Valentine
- Oded Fehr sebagai Carlos Olivera
- Mike Epps sebagai L.J.
- Thomas Kretschmann sebagai Jenderal Cain
- Sophie Vavasseur sebagai Angie Ashford
- Jared Harris sebagai Dr. Ashford
- Zack Ward sebagai Nicholai Ginovaef
- Iain Glen sebagai Dr. Issac
- Raz Adoti sebagai Sersan Peyton Wells
- Sandrine Holt sebagai Terri Morales
- Eric Mabius sebagai Matthew Addison (kilas balik)
- Matthew G. Taylor sebagai Nemesis
