Kultur in vitro tanaman merupakan teknik perbanyakan atau budidaya (kultur) tanaman yang dilakukan dalam skala laboratorium dalam kondisi aseptik atau steril, bebas dari kontaminasi mikroba jamur dan bakteri.
Oleh karena budidaya tanaman tersebut dalam skala laboratorium, maka hanya diperlukan bagian kecil atau bagian tertentu dari suatu jenis tanaman yang akan dikulturkan (dibudidayakan).
Bagian tanaman yang digunakan berupa jaringan dan atau sel tanaman. Bagian tanaman tersebut (disebut eksplan) (Gambar 1) ditanam secara aseptik dalam wadah yang terbuat dari bahan kaca tahan panas, bening transparan, yang berisi media tanam khusus yang disebut media in vitro dan ditempatkan di suatu ruangan yang disebut dengan ruang inkubasi dengan suhu rendah dan menggunakan lampu TL sebagai pengganti sinar matahari. Eksplan pada akhirnya membentuk satu tanaman utuh lengkap (planlet) (Gambar 2).
Proses kultur in vitro tanaman ini, walaupun dapat dilakukan oleh semua orang, namun dibutuhkan keterampilan, keahlian dan pengetahuan khusus untuk mengerjakannya.
Keterampilan dan keahlian itu mencakup kecakapan penggunaan peralatan, pembuatan media tanam in vitro dan teknik penanaman eksplan atau inokulan, dan semua itu dilakukan secara aseptik atau steril, bebas dari mikroba jamur dan bakteri. Pengetahuan dibutuhkan mengenai jenis-jenis media in vitro tanaman beserta komponen-komponen penyusun media dan teknik yang berhubungan dengan pembuatan media tanam tersebut.
Komponen-komponen penyusun media in vitro berupa mineral-mineral atau hara makro dan mikro yang telah dilarutkan dengan air (aquades), sumber energi berupa sukrosa, beberapa jenis vitamin, bahan pemadat untuk media in vitro padat, zat pengatur tumbuh (ZPT), penambahan bahan organik, penambahan arang aktif bila diperlukan, penambahan asam atau basa untuk menyeimbangkan pH media. Dalam suatu jenis media, dapat ditambahkan bahan organik seperti air kelapa, ekstrak wortel atau ekstrak buah pisang, dan lain-lain.
Apakah semua jenis tanaman dapat dikulturkan secara in vitro? Jawabannya bisa. Semua jenis tanaman dapat dikulturkan secara in vitro. Namun, bila kita ingin membudidayakan tanaman dengan teknik ini, sebaiknya harus diketahui dulu apa maksud dan tujuan kita membudidayakan satu atau beberapa jenis tanaman dengan teknik tersebut, agar fokus pekerjaan menjadi lebih efisien dan efektif. Teknik kultur in vitro tanaman ini bertujuan untuk perbanyakan tanaman secara cepat dan dalam jumlah yang banyak.
Tanaman yang dihasilkan memiliki sifat yang sama dengan induknya. Sehingga bila kita mengkulturkan tanaman mangga yang rasa buahnya manis, maka akan dihasilkan turunan tanaman mangga yang manis pula.
Selain itu, dapat pula digunakan untuk menghasilkan tanaman dengan tujuan-tujuan atau sifat-sifat tertentu, misalnya ingin mendapatkan tanaman yang tahan terhadap hama/penyakit, tahan terhadap tanah salin (kadar garam tinggi), kekeringan atau genangan dan sebagainya. Beberapa tanaman, bijinya sulit untuk dikecambahkan, maka dalam teknik ini ada yang disebut dengan embryo rescue atau penyelamatan embrio.